潔凈手術(shù)部工程在設(shè)計、建造和驗收投入使后, 為確保在使用過程中始終能保持在規(guī)定的等級標(biāo)準(zhǔn)要求。或者是由于投入使用后的維護(hù)管理不當(dāng)或手術(shù)室工作人員誤操作以及凈化空調(diào)系統(tǒng)長期使用運轉(zhuǎn)使空氣過濾器性能變化等各類因素, 會影響潔凈手術(shù)部性能參數(shù)。所以投入使用后的潔凈手術(shù)部空氣浮游菌的日常監(jiān)測是十分必要的重要工作。

我們使用環(huán)凱牌浮游菌采樣器（HKM-II）對手術(shù)室進(jìn)行采樣，HKM--II 型浮游菌采樣器是一種高效的多孔吸入式浮游微生物采樣器。它根據(jù)等速采樣理論設(shè)計，采樣準(zhǔn)確。采集頭口風(fēng)速與潔凈室內(nèi)風(fēng)速基本一致，能更準(zhǔn)確地反映潔凈室內(nèi)的微生物濃度。采集樣本時，空氣攜帶顆粒以一定的速達(dá)撞擊在培養(yǎng)基表面，這一過程相當(dāng)于安德森原理的 5 級，保證大于 1 微米的顆粒全部被收集。顆粒均勻撞擊在培養(yǎng)皿內(nèi)的培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)基為細(xì)菌創(chuàng)造了保持活性的最佳環(huán)境，保證了測定結(jié)果精確可靠。采樣準(zhǔn)備工作如下：

1、被測試手術(shù)室(潔凈室)溫、濕度須達(dá)到規(guī)定的要求; 靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。

2、對單向流測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于 10 min;非單向流不少于 30 min 后開始。

3、 靜態(tài)測試時, 室內(nèi)人員不多于 2 人。采樣時測試人員應(yīng)在采樣口下風(fēng)側(cè)。

4、 測試人員應(yīng)按無菌操作規(guī)程進(jìn)行。采取一切措施防止采樣口的污染和其它人為對樣本的污染。

5、測試人員必須穿戴符合潔凈級別的潔凈服。

6、浮游菌測試前, 被測手術(shù)室(潔凈室)已經(jīng)過消毒。

以上準(zhǔn)備好時，我們使用HKM-II采樣器采樣步驟：

1、 在有平臺的潔凈室內(nèi)編制培養(yǎng)皿 (XX 潔凈室, XX 測點), 操作前應(yīng)用浸濕 75%乙醇的醫(yī)用脫脂棉花擦拭平臺。測試人員雙手用同樣方法嚴(yán)格消毒。在編制過程中再次仔細(xì)檢查培養(yǎng)基平皿的質(zhì)量, 有變質(zhì)、破損或污染不能使用。

2、用浸濕 75%乙醇的醫(yī)用脫脂棉花擦拭采樣器的采樣口, 采樣管、采樣器的項蓋, 轉(zhuǎn)盤及罩子內(nèi)外表面。

3、 采樣器經(jīng)消毒后不放入培養(yǎng)皿, 啟動儀器空轉(zhuǎn)運行不少于 5 min, 使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)。

4、 根據(jù)手術(shù)室的潔凈度級別設(shè)定采樣量，采樣器的流量(L/min)X 采樣時間(min)=采樣量(L), 每次最小的采樣量見表 。

5 、放入培養(yǎng)皿,蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣器縫隙高度。采樣操作時, 培養(yǎng)皿應(yīng)輕拿輕放, 用“五指抓拿”培養(yǎng)皿外徑, 盡量避免人為對樣本造成污染。

7、采樣點的布置及采樣點數(shù)量

注意事項：測點的位置離地面 0.8 m~1.5 m 左右(略高于手術(shù)臺面)；送風(fēng)口測點位置離開送風(fēng)口面 0.3 m 左右 

最少采樣點數(shù)目見下表

8、正式啟動HKM-II采樣器

1）按“采樣鍵”進(jìn)入采樣快速參數(shù)選擇狀態(tài)，此時會顯示最近一次用戶設(shè)定或最后

一次使用時的相關(guān)參數(shù)（，參數(shù)組別代碼） 。

2）按“選擇鍵”選擇光標(biāo)調(diào)節(jié)位置，并按“上、下鍵”調(diào)整組編號，更改組編號的同時屏幕亦將同時顯示該組編號下的各項參數(shù)設(shè)置（采樣量，采樣延遲時間，采樣地點代碼） 。

3）選擇適合的組編號后，再按“采樣鍵” ，浮游微生物采樣器即進(jìn)入采樣工作狀態(tài)；此時采樣延遲倒計時將會啟動，采樣延遲倒計時結(jié)束后采樣泵自動開始運行，在到達(dá)設(shè)定的采樣量后，采樣泵將自動停止，屏幕返回主界面，本次采樣結(jié)束，相關(guān)采樣數(shù)據(jù)自動貯存。

8、 培養(yǎng)

8.1、把采樣好的培養(yǎng)皿收集倒置在已消毒過的平臺上。

8.2、用已高壓滅菌過的牛皮紙、包布包裝好裝入消毒盒送培養(yǎng)。

8.3、 雙手再經(jīng)消毒后, 小心取出已采樣過的培養(yǎng)皿樣本, 倒置于 35℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng) 48 h。

9 、菌落計算

9.1、用肉眼直接讀數(shù), 然后用 5~10 倍放大鏡檢查是否有遣漏。若平皿上有 2 個或 2 個以上菌落重疊、分辨時仍以 2 個或 2 個以上讀數(shù)。或用環(huán)凱牌全自動菌落計數(shù)儀smartcounter計數(shù)，方便直接得出結(jié)果。

9.2、填寫生物微粒檢測記錄、記錄表見。

10、 結(jié)果計算：每個測點的浮游菌濃度計算

平均濃度(個/m)=菌落數(shù)/采樣量

11、結(jié)果評定

用浮游菌平均濃度判斷潔凈室(區(qū))空氣中的微生物。(見以下潔凈手術(shù)室的等級標(biāo)準(zhǔn))

注意： 

1）每個測點的浮游菌平均濃度必須低于所選的評定標(biāo)準(zhǔn)中關(guān)于細(xì)菌濃度的界限。

2）若某測點的浮游菌平均濃度超過評定標(biāo)準(zhǔn), 則必須對此區(qū)域先行消毒, 然后重新采樣兩次。再次測試結(jié)果必須合格。